En la industria cosmética, la seguridad y calidad de los productos son aspectos cruciales. Un control microbiológico riguroso es esencial para asegurar que los productos no solo sean eficaces, sino también seguros para los consumidores. Este artículo explica en detalle el proceso de análisis microbiológico en productos cosméticos, los tipos de microorganismos que se detectan y los medios de cultivo utilizados.
Procedimiento de análisis en el control microbiológico
En Shapypro, las muestras se procesan bajo condiciones de máxima asepsia para evitar cualquier tipo de contaminación externa. Para asegurar la esterilidad, se desinfecta la parte externa del envase de la muestra con etanol al 70% y se utiliza material estéril durante todas las operaciones. Las muestras se acondicionan y diluyen cuidadosamente para preservar los microorganismos presentes sin dañarlos, realizando una dilución 1/10 en caldo Eugon LT.
La preparación de muestras se realiza bajo estrictas condiciones de asepsia, dentro de una cabina de seguridad biológica (CSB) y utilizando guantes. Los líquidos, geles, cremas y polvos se agitan bien dentro de su envase primario. Los polvos compactos se disgregan antes de mezclarlos en un mortero estéril con bolas de vidrio estériles. Las pastillas de jabón y otras muestras moldeadas se cortan con cuchilla estéril. Para los aerosoles, se desecha la primera parte de la muestra, se pulveriza directamente dentro de un recipiente estéril y se diluye posteriormente. Las espumas se dejan reposar después de pulverizarse en un recipiente estéril para que desaparezca el gas y se diluyen posteriormente. Las toallitas cosméticas o parches se extraen de su envase y se sumergen en el caldo neutralizante, realizando un análisis paralelo del líquido escurrido si están humedecidos. La muestra se diluye en una proporción 1/10 en Eugon LB Broth para inhibir el conservante, o en agua de peptona si no lleva conservante. Las diluciones sucesivas pueden ser necesarias en caso de alta contaminación, con el fin de obtener un número de UFC comprendido entre los límites recomendados (30-300 UFC/placa).
Las muestras se inoculan en medios de cultivo específicos mediante técnicas de siembra en superficie o en masa. La siembra en superficie se utiliza para repartir homogéneamente una alícuota de la muestra por toda la superficie de la placa de medio de cultivo, facilitando el aislamiento y observación de las colonias. Para la siembra en masa, se dosifica 1 ml de la muestra en una placa de Petri y se vierte el medio de cultivo sobre la placa (20 ml aproximadamente) a una temperatura no abrasiva para los microorganismos presentes en las muestras. Se prepara una placa de control negativo para cada medio sin muestra.
Las placas inoculadas se incuban a temperaturas y tiempos específicos determinados para cada tipo de microorganismo, garantizando así el crecimiento óptimo de los organismos objetivo. Tras el periodo de incubación, se realiza el recuento de las unidades formadoras de colonias (UFC) y se calculan las UFC por ml o gr de muestra, teniendo en cuenta que se han sembrado 100 μl. La sensibilidad de este método es de <100 UFC/g o ml si se ha realizado una dilución 1/10 de la muestra.
Para los microorganismos patógenos (Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans), se realiza una detección cualitativa. Si existe crecimiento, se anota «PRESENCIA» y el número de UFC/ml o UFC/g obtenido, describiendo la morfología de las colonias. En caso de no existir crecimiento, se anota «AUSENCIA» o «0». Los resultados obtenidos se comparan con los criterios de aceptación establecidos por las normativas internacionales para determinar la conformidad microbiológica del producto (ISO 21148:2017, ISO 17516:2014). Los criterios de aceptación son los siguientes: microorganismos aerobios totales: <103 UFC/g o ml; hongos totales: <102 UFC/g o ml; Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Candida albicans: ausencia.
Tipos de Microorganismos Analizados
Microorganismos aerobios totales
Los microorganismos aerobios totales comprenden una amplia variedad de bacterias que tienen la capacidad de sobrevivir en presencia de oxígeno. Estas bacterias incluyen especies mesófilas que se desarrollan en condiciones específicas de cultivo. La presencia de altos niveles de microorganismos aerobios totales en productos cosméticos es indicativa de una posible contaminación y puede reflejar una mala calidad del producto. Esto no solo compromete la eficacia del producto, sino que también representa un riesgo potencial para la salud del consumidor debido a la posibilidad de infecciones. Para el cultivo de microorganismos aerobios totales se utiliza Agar de Soja Tripticaseína (TSA), el cual se incuba a una temperatura de 30-35 °C durante un periodo de 3-5 días, de acuerdo con la norma ISO 17516:2014. TSA es un medio no selectivo que proporciona una base nutritiva rica que apoya el crecimiento de una amplia gama de bacterias mesófilas. Contiene digeridos de caseína y soya que proporcionan nutrientes esenciales, como aminoácidos y nitrógeno, necesarios para el crecimiento bacteriano. La dilución 1/10 en diluyente (Eugon en productos con conservante) se incuba a 32.5 °C durante un mínimo de media hora. El criterio de aceptación para los microorganismos aerobios totales es de menos de 103 UFC/g o ml.
Levaduras y mohos
Este grupo incluye especies de hongos capaces de proliferar en productos cosméticos. Las levaduras son hongos unicelulares que se multiplican principalmente por gemación, mientras que los mohos son microhongos que forman micelio, incluyendo esporas y conidios.
Candida albicans es un hongo patógeno que puede causar infecciones en la piel y mucosas, conocidas como candidiasis. Es una levadura que puede proliferar en condiciones favorables, especialmente en productos cosméticos mal conservados. La presencia de levaduras y mohos puede afectar negativamente la apariencia y la estabilidad del producto cosmético. Además, puede causar infecciones y reacciones alérgicas en los usuarios, comprometiendo así la seguridad del producto. La presencia de Candida albicans en productos cosméticos es inaceptable debido a los riesgos significativos para la salud que representa, incluyendo infecciones cutáneas y sistémicas.
Para la detección y enumeración de levaduras y mohos se utiliza Agar Sabouraud-Dextrosa con antibióticos (SDAa). Las placas de cultivo se incuban a una temperatura de 20-25 °C durante 5-7 días, conforme a la norma ISO 16212:2011. SDA es un medio selectivo diseñado para el cultivo de hongos, enriquecido con dextrosa para promover el crecimiento de levaduras y mohos. La adición de antibióticos, como cloranfenicol o gentamicina, inhibe el crecimiento bacteriano, permitiendo que las levaduras y mohos proliferen sin competencia. El pH ácido del medio también favorece el crecimiento de hongos sobre bacterias. El criterio de aceptación para hongos totales es de menos de 102 UFC/g o ml.
Staphylococcus aureus
Es una bacteria patógena que puede causar una variedad de infecciones, incluyendo infecciones cutáneas, neumonía y septicemia. Es un indicador crítico de contaminación microbiológica y falta de higiene en el proceso de fabricación de productos cosméticos. La presencia de S. aureus en productos cosméticos es inaceptable, ya que representa un alto riesgo de infecciones graves para los consumidores. Su detección indica fallos en los controles de calidad y sanidad durante la producción. Para la identificación de Staphylococcus aureus se emplea Agar Base Baird Parker, que se incuba a 30-35 °C durante 20-72 horas, según lo establecido en la norma ISO 22718:2016. Este medio selectivo contiene telurio y yema de huevo. El telurio inhibe el crecimiento de la mayoría de los otros microorganismos, mientras que la yema de huevo permite la detección de la actividad de la lecitinasa característica de S. aureus. Las colonias de S. aureus aparecen negras y rodeadas de un halo claro debido a la reducción del telurio y la lipólisis de la yema de huevo. La siembra se realiza con 0.1 ml del cultivo de TSB en agar Baird Parker y se incuba a 32.5 ± 2.5 ºC durante 20-72 horas. El criterio de aceptación es la ausencia de Staphylococcus aureus.
Pseudomonas aeruginosa
Es una bacteria patógena conocida por su capacidad para sobrevivir en ambientes húmedos y en productos acuosos. Es particularmente problemática debido a su resistencia a muchos conservantes utilizados en productos cosméticos. La detección de Pseudomonas aeruginosa en productos cosméticos es crítica, ya que puede causar infecciones, especialmente en personas inmunocomprometidas. Su presencia indica una posible contaminación del producto y la ineficacia de los conservantes utilizados. El medio de cultivo utilizado para Pseudomonas aeruginosa es Agar Base Cetrimida, incubado a 30-35 °C durante 20-72 horas, conforme a la norma ISO 22717:2016. La cetramida es un agente tensioactivo que inhibe el crecimiento de la mayoría de las bacterias no deseadas. Pseudomonas aeruginosa puede tolerar cetrimida, lo que permite su crecimiento selectivo. Además, el medio favorece la producción de pigmentos característicos como la piocianina y la fluoresceína, que ayudan en la identificación de P. aeruginosa. La siembra se realiza con 0.1 ml del cultivo de TSB en agar Cetrimida y se incuba a 32.5 ± 2.5 ºC durante 20-72 horas. El criterio de aceptación es la ausencia de Pseudomonas aeruginosa.
Escherichia coli
Es una bacteria que se encuentra comúnmente en el tracto intestinal de los seres humanos y animales. Su presencia en productos cosméticos indica una contaminación fecal y puede causar infecciones graves, como gastroenteritis y sepsis. La detección de E. coli es un indicador crítico de contaminación y falta de control de calidad en la fabricación de productos cosméticos. Su presencia es inaceptable y representa un grave riesgo para la salud pública. Para la detección de Escherichia coli se utiliza Agar MacConkey, con una incubación a 30-35 °C durante 18-72 horas, de acuerdo con la norma UNE-EN ISO 21150:2016. La siembra se realiza con 0.1 ml del cultivo de TSB en agar MacConkey y se incuba a 32.5 ± 2.5 ºC durante 18-72 horas. El criterio de aceptación es la ausencia de Escherichia coli.
Conclusion
En resumen, el control microbiológico en productos cosméticos es esencial para garantizar su seguridad y calidad. Cada microorganismo tiene su propio medio de cultivo y condiciones de incubación, y su presencia o ausencia se utiliza para evaluar la conformidad microbiológica del producto. Los criterios de aceptación son estrictos, asegurando que los productos sean seguros para los consumidores. El control microbiológico es fundamental para asegurar que los productos cosméticos sean seguros y de alta calidad. Este proceso no solo ayuda a prevenir problemas de salud pública, sino que también mantiene la confianza del consumidor en los productos. A través de un riguroso análisis microbiológico, podemos garantizar que nuestros productos cumplen con los más altos estándares de seguridad y calidad. El agar MacConkey es un medio selectivo y diferencial diseñado para el aislamiento de bacilos gramnegativos y la diferenciación de enterobacterias. Contiene sales biliares y cristal violeta que inhiben el crecimiento de bacterias grampositivas. La lactosa y un indicador de pH permiten la diferenciación de organismos fermentadores de lactosa (como E. coli, que produce colonias rosadas) de los no fermentadores (que producen colonias incoloras o transparentes).
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Referencias para el control microbiológico
- ISO 17516:2014: «Cosmetics — Microbiology — Microbiological limits»
- UNE-EN ISO 21150:2016: «Cosmetics. Microbiology. Detection of Escherichia coli«
- ISO 22718:2016: «Cosmetics — Microbiology — Detection of Staphylococcus aureus«
- ISO 22717:2016: «Cosmetics — Microbiology — Detection of Pseudomonas aeruginosa«
- ISO 16212:2011: «Cosmetics — Microbiology — Enumeration of yeast and mould»
- ISO 18416:2016: «Cosmetics — Microbiology — Detection of Candida albicans«
- UNE-EN ISO 21148:2010: «Cosmetics. Microbiology. General instructions for microbiological examination»